近日,西南大學(xué)孫現(xiàn)超教授、黃進(jìn)教授與法國(guó)國(guó)家科學(xué)研究中心(CNRS)Alberto Bianco 教授合作,在材料科學(xué)頂級(jí)期刊《Advanced Functional Materials》(中科院一區(qū)TOP,IF=19)、生物學(xué)頂級(jí)期刊《Plant Biotechnology Journal》(中科院一區(qū)TOP,IF=10.5)以及農(nóng)林科學(xué)頂級(jí)期刊《Journal of Agricultural and Food Chemistry》(中科院一區(qū)TOP,IF=6.2)上發(fā)表系列研究成果,系統(tǒng)報(bào)道了離子型納米農(nóng)藥在植病害防控中的重要進(jìn)展。研究深入揭示了不同離子型納米農(nóng)藥的抗病原機(jī)制及其誘導(dǎo)植物抗性的分子機(jī)制,為綠色高效植物保護(hù)提供了新策略。
植物病害廣泛存在于全球各類作物中,每年造成約10%~20%的農(nóng)作物減產(chǎn),據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估計(jì),全球每年因此損失超過(guò)2200億美元,嚴(yán)重威脅糧食安全與農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的穩(wěn)定發(fā)展。隨著氣候變化和農(nóng)業(yè)集約化的推進(jìn),植物病害的發(fā)生頻率和傳播范圍不斷擴(kuò)大,對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成越來(lái)越嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。為應(yīng)對(duì)植物病害,農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中普遍采用化學(xué)農(nóng)藥、生物防控、抗病品種選育等綜合措施進(jìn)行防治。然而,傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥雖然在短期內(nèi)具有一定效果,但存在防治效率逐年下降、病原微生物耐藥性增強(qiáng)的問(wèn)題,且過(guò)度使用會(huì)對(duì)土壤、水體及非靶標(biāo)生物造成環(huán)境污染與生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。生物防控和抗病育種雖然更加綠色安全,但在實(shí)際應(yīng)用中仍面臨作用慢、適用范圍有限等挑戰(zhàn)。因此,如何實(shí)現(xiàn)高效、可持續(xù)、環(huán)境友好的植物病害防治,已成為當(dāng)前農(nóng)業(yè)領(lǐng)域亟需突破的關(guān)鍵問(wèn)題。
金屬離子是植物正常生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)元素,參與多種酶促反應(yīng)、光合作用及抗氧化系統(tǒng)調(diào)節(jié)。近年來(lái),金屬離子在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛用于調(diào)控植物代謝、增強(qiáng)抗逆性以及防治病原微生物。特別是Zn2+和Mn2+,在抑制植物病原菌、激活植物防御反應(yīng)、促進(jìn)根系生長(zhǎng)和光合效率等方面表現(xiàn)出關(guān)鍵作用。但作為植物必須的微量元素,Zn2+和Mn2+雖在促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育及增強(qiáng)抗病性方面具有重要作用,但其過(guò)量施用可能對(duì)植物造成毒害,限制了其在農(nóng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用。因此,如何在降低施用劑量的同時(shí)提升Zn2+和Mn2+在植物體內(nèi)的生物利用效率,已成為該領(lǐng)域亟需解決的關(guān)鍵問(wèn)題。針對(duì)上述挑戰(zhàn),西南大學(xué)孫現(xiàn)超教授與黃進(jìn)教授團(tuán)隊(duì)提出了一種基于纖維素納米晶(CNC)的新型離子型納米農(nóng)藥構(gòu)建策略。該策略利用CNC優(yōu)異的長(zhǎng)徑比和穿透能力作為載體,結(jié)合聚多巴胺(PDA)對(duì)金屬離子的良好螯合作用,制備出PDA@Zn2+或PDA@Mn2+復(fù)合物,并通過(guò)氫鍵作用將其穩(wěn)定負(fù)載于CNC表面,最終構(gòu)建出表面富含Zn2+或Mn2+的離子型納米農(nóng)藥CNC@PDA@Zn2+與CNC@PDA@Mn2+并用于植物病害防治。
工作一:CNC@PDA@Zn2+通過(guò)增強(qiáng)Zn2+吸收與再分配,調(diào)控植物免疫
植物病毒,特別是煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus, TMV),廣泛侵染多種重要經(jīng)濟(jì)作物,嚴(yán)重威脅全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全與作物產(chǎn)量穩(wěn)定。傳統(tǒng)的化學(xué)防控手段因其防治效果有限、抗藥性發(fā)展迅速及環(huán)境殘留問(wèn)題,已難以滿足可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展的需求。近年來(lái),誘導(dǎo)植物自身免疫、激活系統(tǒng)性獲得性抗性(systemic acquired resistance, SAR)逐漸成為病毒病綠色防控的研究熱點(diǎn)和重要策略。孫現(xiàn)超教授團(tuán)隊(duì)前期研究(Wang et al., Pesticide Biochemistry and Physiology, 2022, 184, 105100)已證實(shí),Zn2+可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞代謝與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,增強(qiáng)植物免疫反應(yīng),進(jìn)而顯著提升植物對(duì)TMV的抗性,揭示了Zn2+在誘導(dǎo)植物抗病性方面的潛力。然而,在研究中發(fā)現(xiàn)Zn2+在植物中的利用效率較低,仍需較高劑量才能實(shí)現(xiàn)有效防控,限制了其在實(shí)際農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。為提升Zn2+的利用效率,孫現(xiàn)超教授與黃進(jìn)教授團(tuán)隊(duì)深入解析了CNC@PDA@Zn2+在植物體內(nèi)促進(jìn)Zn2+高效轉(zhuǎn)運(yùn)與精準(zhǔn)再分配、從而誘導(dǎo)系統(tǒng)性抗性的作用機(jī)制。相關(guān)成果以題為“High-permeability cellulose nanocrystals mediate systemic zinc redistribution through nsLTP2-dependent immune potentiation in plants”發(fā)表在生物學(xué)頂刊《Plant Biotechnology Journal》上。

研究發(fā)現(xiàn)CNC@PDA@Zn2+的具有極強(qiáng)的抗病毒能力。僅在鋅離子有效濃度為44 μg/mL時(shí)就可完全TMV-GFP對(duì)植物的侵染(Figure 1)。

Figure 1: The effect of CNC@PDA@Zn2+ on TMV-GFP infection in vivo.
進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),CNC@PDA@Zn2+可進(jìn)入葉片細(xì)胞并在根、莖、葉中高效積累Zn2+(Figure 2)。揭示了CNC@PDA@Zn2+既提升了鋅供應(yīng),又未引發(fā)毒性,具有良好的系統(tǒng)運(yùn)輸能力和安全性。另外,轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明,CNC@PDA@Zn2+可誘導(dǎo)多種Zn2+結(jié)合蛋白(如超氧化物歧化酶 SOD)的表達(dá)并顯著增強(qiáng)其酶活性(Figure 3a-c)。同時(shí),該材料顯著上調(diào)非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 nsLTP2 的表達(dá),并促使其亞細(xì)胞定位轉(zhuǎn)移至葉綠體和胞外區(qū)域(Figure 3d-g),表明CNC@PDA@Zn2+可通過(guò)激活nsLTP2介導(dǎo)的免疫通路,誘導(dǎo)植物產(chǎn)生廣譜抗性。

Figure 2:Translocation of CNC@PDA@Zn2+ in N. benthamiana.

Figure 3:CNC@PDA@Zn2+ alters nsLTP2 expression
綜上所述,研究表明CNC@PDA@Zn2+可依托CNC優(yōu)異的滲透性,實(shí)現(xiàn)Zn2+在植物體內(nèi)的高效運(yùn)輸與精準(zhǔn)分配。同時(shí)通過(guò)調(diào)控nsLTP2的表達(dá)及亞細(xì)胞定位,激活水楊酸依賴的系統(tǒng)性抗性通路,從而協(xié)同增強(qiáng)植物的抗病毒能力與鋅營(yíng)養(yǎng)調(diào)控效果。
工作二:CNC@PDA@Mn2+激發(fā)自噬,誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性
錳(Mn)不僅是植物光合作用、能量代謝及酶活化等基本生理過(guò)程中不可或缺的營(yíng)養(yǎng)元素,近年來(lái)研究還揭示其在植物抗病中的關(guān)鍵作用,尤其是在調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)方面。例如,外源Mn2+可顯著增強(qiáng)番茄和豆科植物中抗氧化酶的活性,從而提升其對(duì)根腐病等病原菌的抵抗力,表明Mn2+在誘導(dǎo)植物防御反應(yīng)中具有重要潛力。然而,關(guān)于Mn2+是否能夠誘導(dǎo)植物系統(tǒng)性抗性,尤其是其在植物抗病毒中的功能及機(jī)制,目前仍缺乏系統(tǒng)研究。相較而言,Mn2+在動(dòng)物體內(nèi)的免疫調(diào)控功能已被廣泛揭示,研究表明Mn2+可通過(guò)激活胞質(zhì)DNA傳感器cGAS及其下游適配蛋白STING,顯著增強(qiáng)抗病毒免疫反應(yīng)。此外,MnCl2處理能顯著提升細(xì)胞對(duì)單純皰疹病毒1型和水泡性口炎病毒的抵抗力。與此同時(shí),Mn2+還可誘導(dǎo)保護(hù)性自噬反應(yīng),促進(jìn)ROS積累和線粒體自噬,增強(qiáng)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和抗壓能力,甚至提升化療和免疫治療的協(xié)同效果。這些機(jī)制為Mn2+可能在植物中調(diào)控抗病毒免疫提供了啟發(fā)。
盡管Mn2+在動(dòng)物抗病毒研究中已顯示出顯著效果,但其在植物抗病毒中的作用及相關(guān)機(jī)制仍未被明確,研究尚屬空白。鑒于此,系統(tǒng)揭示Mn2+在植物抗病毒中的功能及其潛在的信號(hào)調(diào)控路徑具有重要的理論意義與應(yīng)用前景。針對(duì)該問(wèn)題,孫現(xiàn)超教授、黃進(jìn)教授與法國(guó)科學(xué)院Alberto Bianco院士團(tuán)隊(duì)首次證實(shí)了Mn2+及其復(fù)合材料(CNC@PDA@ Mn2+)在植物中的顯著抗病毒效應(yīng)。機(jī)制研究表明,CNC@PDA@ Mn2+可通過(guò)上調(diào)抗病相關(guān)基因NbHin1的表達(dá),進(jìn)一步激活植物自噬通路,進(jìn)而誘導(dǎo)系統(tǒng)性抗性,實(shí)現(xiàn)對(duì)多種植物病毒的廣譜抑制。這一發(fā)現(xiàn)為Mn2+在植物病毒防治中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ),并為開(kāi)發(fā)新型綠色植保策略提供了創(chuàng)新思路。該工作以題為“Manganese-Enhanced Nanopesticides Augment Plant Resistance against Viral Infection via an Untapped Macroautophagy Pathway”在材料科學(xué)頂級(jí)期刊《Advanced Functional Materials》上成功發(fā)表。

在本研究中,作者證實(shí)CNC@PDA@Mn2+ (CPM)能夠在植物葉片細(xì)胞中富集,其相較于游離態(tài)Mn2+對(duì)病毒粒子具有更強(qiáng)的破壞能力。該材料可通過(guò)直接破壞病毒粒子的結(jié)構(gòu),有效削弱植物病毒的感染能力(Figure 1)。

Figure 1:CPM affects the morphology of TMV particles, and pretreatment of TMV with CPM reduces TMV infectivity in N. benthamiana.
此外,研究還揭示了CPM在植物體內(nèi)釋放Mn2+的機(jī)制。當(dāng)該材料富集于植物細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)的微酸性環(huán)境(如液泡)可削弱PDA中兒茶酚基團(tuán)與Mn2+之間的配位作用,從而促進(jìn)Mn2+的釋放(Figure 2)。同時(shí),釋放的Mn2+可與超氧化物歧化酶(SOD)反應(yīng)生成H2O2,后者又可進(jìn)一步加速PDA的降解,形成一個(gè)正反饋機(jī)制,持續(xù)增強(qiáng)Mn2+的釋放效率。

Figure 2:CPM enrichment in plant vacuoles and its controlled Mn2+ release efficiency.
進(jìn)一步研究表明,CPM可在植物體內(nèi)顯著增強(qiáng)抗病相關(guān)酶(如SOD和POD)的活性。其中,CPM激活的SOD產(chǎn)生的H2O2可能作為關(guān)鍵信號(hào)分子,通過(guò)亞砜化修飾轉(zhuǎn)錄因子CCA1 Hiking Expedition(CHE),增強(qiáng)其對(duì)抗病基因NbHin1啟動(dòng)子的結(jié)合能力,從而上調(diào)NbHin1的表達(dá)。該基因的上調(diào)進(jìn)一步協(xié)調(diào)激活以NbHin1為核心的巨自噬通路,進(jìn)而觸發(fā)多種抗病毒防御反應(yīng),有效抑制煙草花葉病毒(TMV)、蕪菁花葉病毒(TuMV)和馬鈴薯Y病毒(PVY)等多種植物病毒的侵染。
Figure 3:Alteration of Hin1 expression levels in response to nanopesticide exposure.
在本研究中,作者構(gòu)建了一種以CNC為載體、PDA螯合Mn2+的新型納米農(nóng)藥(CPM),實(shí)現(xiàn)了Mn2+的高效遞送與安全應(yīng)用,并首次將其成功用于植物抗病毒。該材料可在葉片中富集,表面Mn2?通過(guò)破壞病毒結(jié)構(gòu)抑制感染,并在細(xì)胞內(nèi)酸性或H2O2刺激下持續(xù)釋放Mn2+,兼具促生長(zhǎng)與環(huán)境響應(yīng)功能。此外,CPM還能激活SOD產(chǎn)生活性氧,誘導(dǎo)CHE調(diào)控NbHin1表達(dá)并啟動(dòng)自噬通路,增強(qiáng)植物系統(tǒng)性抗病毒免疫(Figure 4)。本研究不僅開(kāi)發(fā)了高效抗病毒納米平臺(tái),也揭示了Mn2+參與植物免疫的新機(jī)制。

Figure 4:Schematic illustrating the synthesis of CPM (CNC@PDA@Mn2+) and its mechanism of enhancing plant antiviral resistance.
工作三:CNC@PDA@Zn2+增強(qiáng)Zn2+對(duì)卵菌無(wú)性繁殖的抑制作用
植物卵菌是農(nóng)業(yè)領(lǐng)域極具破壞性的病原體,能引發(fā)多種嚴(yán)重植物病害,導(dǎo)致作物大面積枯萎和產(chǎn)量銳減。例如,馬鈴薯晚疫病的爆發(fā)曾引發(fā)19世紀(jì)愛(ài)爾蘭大饑荒,造成廣泛的糧食危機(jī),充分暴露了卵菌對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和全球糧食安全的重大威脅。目前,植物卵菌的防治主要依賴化學(xué)農(nóng)藥,但長(zhǎng)期使用容易導(dǎo)致病原產(chǎn)生耐藥性,降低防控效果。近年來(lái)研究表明,孢子是卵菌傳播和感染的關(guān)鍵來(lái)源,抑制其無(wú)性繁殖過(guò)程,尤其是孢子囊的形成與孢子的釋放,對(duì)于有效防控病害至關(guān)重要。近些年來(lái),Zn2+被報(bào)道具備抑制卵菌繁殖的潛力;诖,孫現(xiàn)超教授與黃進(jìn)教授系統(tǒng)研究了CNC@PDA@Zn2+對(duì)辣椒疫霉無(wú)性繁殖的抑制作用及其分子機(jī)制,相關(guān)結(jié)果以題為“Harnessing CNC-Carrier Nanomaterials for Enhanced Zn2+-Mediated Inhibition of Oomycete Asexual Reproduction”發(fā)表在農(nóng)林科學(xué)TOP期刊《Journal of Agricultural and Food Chemistry》。

在該研究中,研究人員發(fā)現(xiàn),CNC@PDA@Zn2+(CPZ)因表面高密度富集的Zn2+,顯著增強(qiáng)了對(duì)辣椒疫霉孢子囊形成及孢子釋放的抑制效果(Figure 1),同時(shí)還能破壞孢子細(xì)胞膜,進(jìn)一步抑制孢子活力(Figure 2)。

Figure 1:CPZ inhibits the asexual reproduction of P. capsica.
機(jī)制研究表明,CPZ通過(guò)抑制辣椒疫霉無(wú)性生殖相關(guān)基因(PcATP4、cdc及G蛋白)的表達(dá),進(jìn)而顯著降低其對(duì)植物的侵染能力(Figure 2)。

Figure 2: CPZ disrupts spore cell structure and inhibits the expression of asexual reproduction-related genes.
綜上所述,作者在本研究中發(fā)現(xiàn),CPZ不僅顯著增強(qiáng)了對(duì)卵菌的殺滅效果,還實(shí)現(xiàn)了用量的降低和生物安全性的提升。CPZ通過(guò)抑制關(guān)鍵孢子形成基因(PcATP4、cdc和G蛋白)的表達(dá),有效抑制了辣椒疫霉(P. capsici)孢子囊的形成及孢子的釋放,進(jìn)一步地破壞孢子細(xì)胞膜并改變細(xì)胞器結(jié)構(gòu)進(jìn)而抑制P. capsici對(duì)寄主的侵染能力(Figure 3)。本研究創(chuàng)新性地設(shè)計(jì)并合成了一種針對(duì)卵菌無(wú)性繁殖的離子型納米農(nóng)藥,為卵菌防治提供了全新的策略和研究方向。

Figure 3: Synthesis Strategy of CNC@PDA@Zn2+ and Its Application in Controlling P. capsici in Peppers.
上述研究工作由西南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院孫現(xiàn)超教授、化學(xué)化工學(xué)院黃進(jìn)教授,以及法國(guó)國(guó)家科學(xué)研究中心(CNRS),歐洲科學(xué)院院士Alberto Bianco教授共同指導(dǎo)。西南大學(xué)碩士畢業(yè)生向順雨、王靖、王小燕、諶陽(yáng)和陳美均為相關(guān)論文的共同第一作者。該研究得到了國(guó)家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào)31870147)、中國(guó)煙草總公司重慶公司科技項(xiàng)目(B20241NY1303、B20241NY1310)及國(guó)家留學(xué)基金委資助項(xiàng)目(202306990064、202006990010)的支持。特別感謝瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)、德國(guó)馬普研究所彭浩然博士和明斯特大學(xué)劉昌云博士在相關(guān)分子機(jī)制研究中提供的寶貴建議與指導(dǎo)。
原文鏈接
https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acs.jafc.5c00381
https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.202500538
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/pbi.70230
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